生物除油剂初步研究：实验

2．1菌种来源

    自然环境中，能够降解石油成分的微生物多达200种以上。其中，假单胞菌属、棒杆菌属、微球菌属和产碱杆菌属中存在许多高效降解石油成分的细菌菌株^[2-3]。本试验从各种石油污染的环境中采集菌种样品，作为富集驯化的菌源：(1)以威海槐云路五菱汽车修配厂废机油、汽油、柴油污染的土壤为样品1；(2)以威海东方大众汽配厂受油污污染的土壤为样品2；(3)以威海宇成线业有限公司污水排放口的土壤为样品3；(4)以电镀厂废油污染的土壤为样品4。

2．2培养基

    牛肉膏蛋白胨培养基用于细菌总数的测定和微生物分离，原油无机盐培养基用于原油降解菌平板数量的测定。原油无机盐培养基(pH=7．2)的成分如下(以质量分数表示)：润滑油0．2‰NaCl 0．5‰(NH₄)₂S0₄0．1％，MgS0₄·7H₂0 0．025％，NaN0₃ 0．2％，KH₂P0₄0．5％，K₂HP0₄·H₂0 1．0％，琼脂l．6％。

2．3试剂和仪器

    所用石油醚等试剂均为市售分析纯。

    恒温振荡器，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；pH／温度测试笔，意大利哈钠公司；紫外一可见分光光度计、分析天平和可见分光光度计，上海精密仪器有限公司；离心机，上海安亭科学仪器厂。

2．4富集驯化处理

各称取1～4号样品200 g，分别加入蒸馏水800 mL，搅拌30 min，静置沉淀，上清液转移到l0 L的玻璃瓶中，从而获得多种来源的混合菌种。然后，加入土壤浸提液1L[1 L水中加入200 g肥沃土壤(提供各种元素)，搅拌，沉淀，获得的上清液为土壤浸提液]，控制温度在35 ℃、pH 8．5，曝气富集驯化数天。混合液曝气驯化l d后测定残油含量，然后定量补充润滑油、无机磷和无机氮等元素，调整混合液中碳、氮、磷的比例，以利于微生物的生长。富集驯化液中C(即7样机油，为驯化液质量分数的l％)、N[即(NH₄)₂S0₄]和 P(即KH₂P0₄)的质量比约为l00：5：1。除油微生物驯化装置如图l所示。

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